exoEasy Maxi Kit，qiagen外泌體提取試劑盒 

exoEasy Maxi Kit(20) 

Cat.No./ID:76064

For 20 vesicle preps:20 exoEasy Maxi Spin Columns,Collection Tubes(50ml),Reagents and Buffers

exoEasy MaxiKit使用了膜親和離心柱來高效地從血漿、血清、細胞培養(yǎng)上清及其他生物液體中提取獲得exosome及其他細胞外囊泡，Maxi規(guī)格的離心柱可允許外理大體積的樣品，包括高達4ml的而漿或而清，或者32ml的細胞培養(yǎng)上清，實驗流程非?？焖僖恢?，非常適用于提取EV進行exosome及其他細胞外囊泡的功能性分析。

Performance

用于純化外泌小體及其他細胞外囊泡的exoEasy實驗方案不僅比超速離心更加快捷，而且可獲得更潔凈的純化產(chǎn)物。掃描電子顯微鏡顯示兩種技術均可提供完整的預期尺寸的囊泡，不過通過超速離心法制得的樣品中還含有一些并不符合EV尺寸或外形的更小的結(jié)構。

提取獲得的囊泡具有完整的功能，可用于多種下游應用，包括細胞培養(yǎng)等工作。洗脫的囊泡的性質(zhì)和數(shù)量可通過多種不同的方法進行測定。其中包括電子顯微鏡、物理特征描述(例如，納米顆粒追蹤分析(NTA)，或可調(diào)電陰脈沖感應(TRPS)微粒分子成分分析(例如蛋白質(zhì)核酸或脂米)等，由干如NTA或TRPS等微粒計數(shù)方法無法將囊泡與其他懸浮顆粒區(qū)分開，使用未經(jīng)處理的生物液體或仍含有其他顆粒物(例如，蛋白復合物)的粗制備樣品進行顆粒計數(shù)可能會明顯地高估囊泡數(shù)目。 Principle

exoEasy Kit在傳統(tǒng)的超速離心exosome或微泡提取方法的基礎上進行了改進，可在25分鐘內(nèi)獲得純化的細胞外囊泡。

exoEasy Maxi Kit使用了膜親和結(jié)合步驟來從血漿、及血清或細胞培養(yǎng)上清中分離exosome及其他EV。這種方法無法通過大小或細胞來源對EV進行區(qū)分，也不依賴干是否存在微粒表位，它運用了囊泡的通用生化特性來提取樣品中的所有細胞外囊泡(參見圖片使用NTA對由exoEasyMaxiKit提取獲得的細胞外囊泡進行性質(zhì)分析)。因此，必須*去除細胞、細胞碎片、凋廣小體等組分，可在開始提取步驟前對樣品進行離心或過濾等操作。

Exosome Diaanostics.Inc.開發(fā)的技術使用了離心柱及專門的緩沖液來從預過濾的生物液體中純化exosome;口外理高達4 ml的血漿或而清。對干細胞培養(yǎng)上清，經(jīng)試驗驗證可從高達32ml的樣品中成功提取外泌小體(4次離心柱上樣步驟)。不過，上清中的囊泡濃度非常依賴于細胞類型及培養(yǎng)條件;因此我們建議，對于未經(jīng)過該試劑盒測試樣品材料，起始上清體積不要超過16ml。更高的樣品體積可能導致囊泡的回收率降低。實驗流程非常快速一致，非常適用于exosome及其他細胞外囊泡的功能性分析。除囊泡之外的懸浮顆粒絕大部分可在結(jié)合及清洗步驟中被去除，這種顆粒包括了大體積的蛋白復合物，其在血漿及血清中含量很高。

 Procedure

提取細胞外囊泡的總流程僅需要25分鐘。將預先過濾過的而漿，而清或細胞培養(yǎng)上清(去除了尺寸大干0.8um的顆粒)與 Buffer XBP進行混合并結(jié)合在exoEasv膜親和第心柱上。對結(jié)合的外泌小體使里Buffer XWP進行清洗，并隨后使用400ul Buffer XE(主要含無機鹽的水緩沖液)進行洗脫，隨后即可用于物理或生化分析。對于特定應用，如生物檢測等，可能需要進行額外的濃縮或緩沖液置換步驟。此步驟可通過孔徑尺寸為100kDa或更小的超濾方法來實現(xiàn)。 

Applications

exoEasy Kit非常適合于從血漿、血清、細胞培養(yǎng)上清及其他生物液體中提取微囊泡。提取獲得的囊泡可用于如下應用進行分析:

· 物理性質(zhì)分析(例如，NTA，TRPS)

· 電子昂微鏡

· 提取并分析DNA、RNA*、蛋白質(zhì)、脂類及其他成分

· 流式細胞術

· 抗體或熒光染料標記

· 受體細胞的攝取

*如需提取囊泡RNA，我們推薦使用exoRNeasv試劑盒。