MLPA技術(shù)，即多重連接探針擴(kuò)增技術(shù)，于2002年首先報(bào)道，是近幾年發(fā)展起來(lái)的一種針對(duì)待檢DNA序列進(jìn)行定性和半定量分析的新技術(shù)。該技術(shù)高效、特異，在一次反應(yīng)中可以檢測(cè)45個(gè)核苷酸序列拷貝數(shù)的改變，已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域、多種疾病的研究。下面讓我們一起來(lái)看看MLPA技術(shù)的試驗(yàn)原理吧！

在MLPA實(shí)驗(yàn)中，純化的樣本DNA被變性。之后用MLPA探針寡核苷酸孵育過(guò)夜。每個(gè)MLPA探針都具有針對(duì)特定基因組序列的探針。每對(duì)MLPA探針包括兩條單鏈DNA:左側(cè)探針和右側(cè)探針寡核苷酸。簡(jiǎn)稱分別是LPO和RPO。LPO和RPO包含PCR引物和DNA雜交序列。

在MLPA反應(yīng)中，左探針寡核苷酸（LPO）和右探針寡核苷酸（RPO）都與靶序列進(jìn)行雜交，之后使用連接酶連接兩部分探針。

將雜交的探針寡核苷酸連接到鄰近的目標(biāo)序列。探針連接產(chǎn)物的數(shù)量是樣品中目標(biāo)序列數(shù)量的度量。連接反應(yīng)具有高度特異性，連接部位周圍沒有錯(cuò)配。

使用單個(gè)通用引物對(duì)在多重PCR中擴(kuò)增連接的探針。只有連接的探針呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)增，使得不需要去除未連接和未連接的探針。

再通過(guò)毛細(xì)管電泳進(jìn)行片段分離，通過(guò)MRC Holland的分析軟件進(jìn)行分析得出結(jié)論。PCR產(chǎn)物裝載到毛細(xì)管電置上，按長(zhǎng)度分離。每個(gè)片段對(duì)應(yīng)一個(gè)特定的MLPA探針。

MLPA結(jié)合了DNA探針雜交和PCR技術(shù)，不僅可以用來(lái)檢測(cè)與疾病相關(guān)的CNV（?拷貝數(shù)變異）?，?例如遺傳性乳腺癌、?結(jié)腸癌、?杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良等，?還可以用于腫瘤中的CNV檢測(cè)，?以優(yōu)化腫瘤分型。任何技術(shù)都有其優(yōu)缺點(diǎn)。

優(yōu)點(diǎn)：

1、高效：一次反應(yīng)可以檢測(cè)45個(gè)靶序列拷貝數(shù)的改變。

2、特異：可以檢測(cè)點(diǎn)突變。

3、快速：一次實(shí)驗(yàn)可以在24小時(shí)內(nèi)完成。

4、簡(jiǎn)便：不同的試劑盒操作基本相同，容易掌握。

缺點(diǎn)：

1、需要精確測(cè)量DNA的濃度，樣本容易被污染。

2、不能用于單個(gè)細(xì)胞的檢測(cè)。

3、MLPA用于檢測(cè)基因的缺失或重復(fù)，不適合檢測(cè)未知的點(diǎn)突變類型。

4、不能檢測(cè)染色體的平衡易位。