數(shù)字PCR突變檢測介紹
數(shù)字PCR(digital PCR,dPCR)通過將微量樣品進(jìn)行微滴化處理,即稀釋和分液,直每個細(xì)分樣品中所含有的待測分子數(shù)一般不超過1(0或1)個,將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個納升級的微滴。再將所有微量樣品在相同條件下進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),使含有目標(biāo)分子的微量樣品中的目標(biāo)分子增加成千上萬倍,產(chǎn)生強(qiáng)的熒光信號,后對發(fā)生了擴(kuò)增反應(yīng)的微量樣品進(jìn)行統(tǒng)計,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。
數(shù)字PCR技術(shù)在稀有突變檢測、microRNA表達(dá)、無創(chuàng)產(chǎn)前篩查、拷貝數(shù)變異、測序文庫定量、評估基因編輯效率(GEF)等方面有著很大的應(yīng)用潛力,未來將會得到進(jìn)一步的發(fā)展。
技術(shù)原理
技術(shù)優(yōu)勢
1、高靈敏度:通過放大單分子信號,有效消除背景噪音。
2、高準(zhǔn)確性:能夠?qū)崿F(xiàn)定量初始模板中的分子數(shù)。
3、檢測限超低:能夠檢測出微量突變和低拷貝量分子。
與普通熒光定量PCR的區(qū)別
傳統(tǒng)的實時定量PCR(qPCR)技術(shù)依靠標(biāo)準(zhǔn)曲線或參照基因來測定核酸量,是一種相對定量技術(shù)。在靶分子數(shù)目極少或者模板濃度差異細(xì)微時,其檢測靈敏度、度都受到很大限制。
作為第三代PCR技術(shù)的數(shù)字PCR,通過精細(xì)的微滴化處理,能夠直接檢測統(tǒng)計目標(biāo)核酸分子的數(shù)目,不再依賴任何參照,可確定低單個待測核酸分子,實現(xiàn)定量。
服務(wù)內(nèi)容
1、項目咨詢,包括樣本類型,基因和檢測突變位點的選取。
2、DNA樣本的提取和質(zhì)檢。
3、引物和探針的設(shè)計、合成與優(yōu)化。
4、實驗操作。
5、數(shù)據(jù)分析和項目報告。
服務(wù)流程
1、提交項目課題相關(guān)需求和資料。
2、與我們的專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊討論項目細(xì)節(jié)。
3、根據(jù)討論后的意見對實驗方案進(jìn)行修改。
4、雙方均滿意并達(dá)成一致,簽訂技術(shù)服務(wù)合同。
5、開展實驗,按期完成合同規(guī)定的內(nèi)容。
6、結(jié)題,提供實驗原始結(jié)果和分析結(jié)果、實驗流程、實驗條件等等。
我們的優(yōu)勢
1、提供各種實驗材料和儀器,滿足項目課題實驗需要。
2、專業(yè)的操作人員。
3、高規(guī)格實驗室。
4、數(shù)據(jù)結(jié)果交付周期快。
5、完善的服務(wù)體系,全程跟進(jìn),確保滿意。
咨詢與訂購
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