先讓我們來說說
百奧創(chuàng)新分離試劑盒！該試劑盒用于懸浮或貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞系。它能快速有效的將培養(yǎng)的細(xì)胞分成三個不同的組分（細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜/細(xì)胞器、細(xì)胞核/細(xì)胞骨架）進(jìn)而確定蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。細(xì)胞組分分離對于研究許多蛋白質(zhì)的定位、觀察蛋白質(zhì)的遷移和確定蛋白-蛋白絡(luò)合物（如細(xì)胞支架有關(guān)的蛋白）有重要意義。
試劑盒中CIB緩沖液分離細(xì)胞質(zhì)的蛋白，MIB緩沖液分離完整的膜和細(xì)胞器的蛋白，CyNIB緩沖液分離細(xì)胞核和細(xì)胞骨架的蛋白。試劑盒包含足夠的緩沖液，能進(jìn)行20次測定。
那么，分離到的各組分在用于SDS-PAGE和WB分析其他指標(biāo)之前，可先測定組分分離效率。這就用到了我們的百奧創(chuàng)新檢測試劑盒Cell Fractionation Antibody Sampler Kit #11843。其中#8727 MEK1/2(D1A5) Rabbit mAb用于檢測細(xì)胞質(zhì)的蛋白（Cyto），#5318AIF(D3902)XP® Rabbit mAb用于檢測完整的膜和細(xì)胞器的蛋白（Mem），#4499Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb和#5741 Vimentin(D21H3) XP®Rabbit mAb可分別用于檢測細(xì)胞核和細(xì)胞骨架的蛋白（Nuc）。
全細(xì)胞裂解物（WCL）代表總蛋白質(zhì)。該圖顯示細(xì)胞質(zhì)的蛋白（Cyto），完整的膜和細(xì)胞器的蛋白（Mem）和細(xì)胞核和細(xì)胞骨架的蛋白（Nuc）分離干凈且效率高。
zui后，百奧創(chuàng)新小編給大家總結(jié)了實(shí)驗(yàn)中的注意事項：
1.除了添加和超聲 CyNIB buffer 外，其他所有步驟都需要在冰上或 4℃ 操作。
2.該試劑盒可用于貼壁或懸浮的細(xì)胞。
3..1X 蛋白酶抑制劑 (#5871) (每500μl buffer 中加入5μl 100x 的蛋白酶抑制劑，試劑盒包含) 和 1 mM 新鮮的 PMSF (#8553) (每500μl buffer 中加入2.5 μl 200 mM 的 PMSF, 試劑盒不包含) 需現(xiàn)配現(xiàn)用。
4.Buffer中已含磷酸酶抑制劑，無需額外添加。
5.步驟D和E中所給體系，是根據(jù)10cm 培養(yǎng)皿中90%融合度的HeLa細(xì)胞（——5x106個細(xì)胞）得來的。
6.如果 CyNIB buffer 溶解后有絮狀物，請在37℃水浴中孵育*溶解。
7.注意：保存各組分時需十分小心不要吸到沉淀，以免污染。
8.所有裂解液短期保存（1月內(nèi)）需放 -20°C，長期保存（1月以上）則需放-80°C 。
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